Chuẩn bị mẫu:
Thu thập mẫu: Thu thập các mẫu như máu, mô, nước bọt và nước tiểu theo mục đích của thí nghiệm.
Chiết xuất DNA: Sử dụng bộ trích xuất DNA chuyên dụng để trích xuất DNA từ mẫu.
Chuẩn bị phản ứng PCR:
Thiết kế mồi: Thiết kế các cặp mồi cụ thể dựa trên trình tự mục tiêu để khuếch đại DNA mẫu.
Chuẩn bị hỗn hợp phản ứng: bao gồm DNA mẫu, mồi, bộ đệm, DNA polymerase, DNTP (deoxynucleoside triphosphates), mg 2+, v.v.
Đặt chương trình PCR:
Cài đặt dụng cụ PCR: Nhập các tham số chu kỳ PCR đặt trước, chẳng hạn như nhiệt độ làm nóng trước 95 độ, nhiệt độ biến tính (như 95 độ), nhiệt độ ủ (như 55 độ), nhiệt độ mở rộng (như 72 độ) và số chu kỳ.
Phản ứng PCR:
Thêm mẫu: Thêm hỗn hợp phản ứng vào bể phản ứng PCR hoặc chip, và mỗi mẫu thường có một phản ứng tốt.
Thực hiện PCR: Các chu kỳ thiết bị PCR theo chương trình đặt trước, bao gồm sưởi ấm, làm mát, ủ và các bước mở rộng.
Phân tích sản phẩm:
Làm mát sau khi khuếch đại: Sau khi hoàn thành PCR, mẫu được làm mát ngắn gọn ở 4 độ.
Tách điện di: Sử dụng công nghệ điện di gel, như điện di gel agarose, để tách các sản phẩm PCR có độ dài khác nhau.
Quét huỳnh quang: Các đoạn mồi được dán nhãn huỳnh quang phát ra ánh sáng của một bước sóng cụ thể trong sản phẩm được khuếch đại và thiết bị PCR đọc các tín hiệu này và ghi lại chúng.
Xử lý và giải thích dữ liệu:
Phần mềm phân tích dữ liệu: Sử dụng phần mềm chuyên dụng để phân tích tín hiệu huỳnh quang và tính toán nồng độ hoặc nồng độ tương đối của đoạn mục tiêu.
Giải thích kết quả: Dựa trên đường cong và đường cơ sở PCR, hãy xác định xem PCR có thành công hay không, liệu đoạn mục tiêu có tồn tại hay không và nó là bao nhiêu.
Ghi và bảo quản kết quả:
Ghi lại kết quả trong báo cáo thử nghiệm và bảo tồn đúng dữ liệu và mẫu gốc.